一、標(biāo)準(zhǔn)曲線

 分析檢測中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的目的是可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出待測物質(zhì)的含量，所以標(biāo)曲的制定是實(shí)驗(yàn)室工作中必不可少的工作。

 很多用戶對于標(biāo)準(zhǔn)曲線有很多疑問，例如做標(biāo)準(zhǔn)曲線真的那么簡單？你的標(biāo)曲真的做好了嗎?導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)曲線彎曲的原因是什么？RSD值、線性相關(guān)系數(shù)和線性方程如何？線性好與不好分別由于哪些原因造成的？是儀器、標(biāo)液，還是配制的問題？

 首先說明下前期測定時(shí)注意事項(xiàng)：

1、儀器校驗(yàn)好。

2、移取液體體積要精確，保證迅速準(zhǔn)確，盡可能用一根移液管；為減小人為誤差，同一種液體要一個(gè)人操作。

3、保證標(biāo)準(zhǔn)品的純度，所用標(biāo)準(zhǔn)品最好是新打開的，純度較高的固體或溶液，防止污染。

4、容器要保證潔凈。

5、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品理化性質(zhì)注意加樣的先后順序。

6、如果要測OD值，應(yīng)保證測前各管液體充分混勻。

7、若還是有某個(gè)點(diǎn)誤差較大，應(yīng)舍棄。

    其次，還要了解如下知識：

1.樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的，所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事，否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。

2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈s型的標(biāo)準(zhǔn)曲線，盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3、最好采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度，這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。

4、檢測標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準(zhǔn)確性。

5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn)，但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。

6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng)，但一般來說，相關(guān)系數(shù)r至少要大于0.98，對于有些實(shí)驗(yàn)，至少要0.99甚至是0.999.

二、分光光度?法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線所遇問題

1、單色光純度不夠

問題：標(biāo)準(zhǔn)曲線上端向下彎曲。

措施：光度法中要求在最大吸收峰處測定吸光度，光度計(jì)的有效譜帶寬度越窄越好，有利于獲得純度高的單色光。

2.比色皿的厚度或光學(xué)性能不一致

如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或?qū)獾奈蘸头瓷渖僖恍?，則曲線的延線與縱坐標(biāo)相交；反之，與橫坐標(biāo)相交。

3.顯色反應(yīng)和反應(yīng)條件的問題

當(dāng)顯色反應(yīng)的靈敏度不高時(shí)，被測物低于某一濃度就不能顯色，當(dāng)濃度不同時(shí)，溶液對光的吸收、散射的程度不同，低濃度段往往彎曲，加上濃度高時(shí)部分膠體顆粒的聚沉，致使測定的吸光度降低，曲線上端向下彎曲。

4.操作上的原因

問題：褪色反應(yīng)，顯色溶液的顏色不穩(wěn)定、易褪色，若比色時(shí)間超過了穩(wěn)定時(shí)間，標(biāo)準(zhǔn)系列中高濃度溶液顏色減褪，致使曲線上端向下彎曲。

措施：控制好顯色劑的加入時(shí)間，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次進(jìn)行，以使每支比色管的顯色時(shí)間相近。

5、干擾物質(zhì)的影響

三、標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)是實(shí)際操作中最大的難點(diǎn)，也是工作中誤區(qū)和爭議最多的話題，下面了解下最重要的三大檢驗(yàn)項(xiàng)目：

1.精密度檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的精密度檢驗(yàn)：精密度檢驗(yàn)就是看試驗(yàn)點(diǎn)距離擬合的直線的距離有無異常，所以也稱線性檢驗(yàn)（擬合檢驗(yàn)），需用F檢驗(yàn)，P<0.05作為線性檢驗(yàn)合格的標(biāo)準(zhǔn)。

2.截距檢驗(yàn)

3.斜率檢驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距檢驗(yàn)和斜率檢驗(yàn)分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，a與0有差別說明有試劑空白或系統(tǒng)誤差，而b若與0沒差別說明儀器的靈敏度根本達(dá)不到分析要求。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的檢驗(yàn)應(yīng)該是線性檢驗(yàn)結(jié)合失擬檢驗(yàn)，以及殘差的正態(tài)性檢驗(yàn)結(jié)合才是統(tǒng)計(jì)學(xué)上比較完備的。

（內(nèi)容參考實(shí)驗(yàn)與分析網(wǎng)）

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