一、液相色譜峰保留時(shí)間延長(zhǎng)

1、流速降低

檢查并重新設(shè)置流速，檢查泵是否有氣泡，檢查泵密封墊是否滲漏，以及單向閥和其它系統(tǒng)滲漏。

2、流動(dòng)相組成改變

檢查系統(tǒng)是否有漏液點(diǎn)，排除系統(tǒng)氣泡，補(bǔ)足溶劑瓶，確保梯度系統(tǒng)比例正確，預(yù)混合流動(dòng)相進(jìn)行等梯度洗脫，流動(dòng)相組成的問(wèn)題。

在反相色譜中，保留因子k和流動(dòng)相中有機(jī)相的比例是成指數(shù)關(guān)系的。通常有機(jī)相變化1%，保留時(shí)間會(huì)變化5%-15%，一般是10%。

pH變化0.1會(huì)導(dǎo)致保留時(shí)間變化10%，所以要準(zhǔn)確的測(cè)量pH，并且要校正好pH計(jì)，在反相色譜中隨著pH的增加，酸性化合物保留時(shí)間縮短，而堿性化合物延長(zhǎng)。

離子對(duì)試劑的濃度會(huì)影響離子型化合物組分的保留時(shí)間。帶有和離子對(duì)試劑相反電荷的分析物的保留時(shí)間會(huì)縮短，帶同樣電荷的會(huì)延長(zhǎng)。

正相色譜的保留時(shí)間對(duì)流動(dòng)相中的極性成分非常敏感，任何情況下水都是一個(gè)麻煩，使用半飽和水的非極性溶劑比如正己烷和二氯甲烷來(lái)避免這個(gè)問(wèn)題。

3、鍵合相流失

對(duì)于常用硅膠型色譜柱，要保持流動(dòng)相pH2~8之間。對(duì)于極高pH（>10）或極低pH（<2）的工作，使用高穩(wěn)定性固定相，聚合物或高穩(wěn)定性固定相柱。

4、硅膠填料的活化位點(diǎn)

使用流動(dòng)相改性劑;流動(dòng)相中加競(jìng)爭(zhēng)堿;固定相用更高覆蓋度的填充料。

5、溫度降低

控制柱溫，通常溫度每變化1℃保留時(shí)間變化1%-2%。一般情況下影響沒(méi)有那么大，顯然這種問(wèn)題用柱溫箱就可以避免。

二、液相色譜峰保留時(shí)間縮短

1、色譜柱填料的活性位點(diǎn)

使用流動(dòng)相改性劑，競(jìng)爭(zhēng)堿（堿性化合物，如三乙胺）或增加緩沖液強(qiáng)度，使用高覆蓋率的柱填料。

2、流動(dòng)相組成改變

檢查系統(tǒng)是否有漏液點(diǎn)；排除系統(tǒng)氣泡；補(bǔ)足溶劑瓶；確保梯度系統(tǒng)比例正確；預(yù)混合流動(dòng)相進(jìn)行等梯度洗脫。

3、樣品過(guò)載

減少樣品量或使用較大內(nèi)徑或更長(zhǎng)的色譜柱。

4、鍵合相或硅膠基流失

使用溫和pH的流動(dòng)相；使用耐受高pH或低pH專用硅膠柱，聚合物柱或其它高/低pH柱。

5、 色譜柱老化

使用保護(hù)柱，或高穩(wěn)定性鍵合相聚合物、混合型或高穩(wěn)定性柱。

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