液相色譜儀的分離原理是利用待分離的各種物質(zhì)在固定相和流動相兩相中的分配系數(shù)、吸附能力、親和能力等的不同來進行分離的。改善液相色譜的分離度主要有以下三個方面：

一、流動相

1、流動相中有機溶劑的類型和比例會影響色譜分離的選擇性

對于反相色譜模式，常用的有機溶劑有甲醇、乙腈和四氫呋喃，可以通過改變流動相中的有機相種類或調(diào)整其比例，來改變選擇性和分離度。

2、流動相的pH值影響分離度

對于中性的化合物，流動相pH值的改變不會對其選擇性有太大的影響，對于酸性化合物和堿性化合物(可解離的化合物)，影響較大。

3、可以通過添加緩沖鹽來調(diào)整流動相的離子強度，來改善目標化合物與固定相之間的保留。

二、固定相

固定相中鍵合相的類型、填料的孔徑、封端類型以及色譜柱的粒徑和尺寸都會影響色譜分離的結(jié)果。

其中最主要的因素是鍵合相的選擇，當你采用C18固定相無法得到好的分離結(jié)果，可以考慮極性較強的C8固定相，或者選擇性與其有較大差異的苯基己基柱進行嘗試，或者采用封端的色譜柱代替未封端的色譜柱。

三、硬件系統(tǒng)

對硬件系統(tǒng)的一些參數(shù)進行調(diào)整，也可以在一定程度上改善色譜分離的結(jié)果。

比如較高的采樣速率；采用較小內(nèi)徑的管線和較小的流通池來減小擴散體積和延遲體積減小色譜峰的展寬；或者通過提高色譜柱的柱溫來改善分離度。

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