液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進(jìn)行先分離，而后分析鑒定的儀器，具有高分辨率、高靈敏度、速度快、分離效率高、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無機(jī)分析、石油化工等各種領(lǐng)域。高效液相色譜進(jìn)樣前，必須選擇一種合適的溶劑體系，若溶劑選擇不當(dāng)會使得峰形發(fā)生不同程度的異常，進(jìn)而影響分析結(jié)果。

上海儀電分析LC220高效液相色譜儀

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一、溶劑效應(yīng)的概念

通常情況下我們認(rèn)為的溶劑效應(yīng)是樣品溶劑強(qiáng)度大于流動相強(qiáng)度時造成的色譜峰變形的現(xiàn)象。但我們會發(fā)現(xiàn)，有時我們的樣品溶劑的強(qiáng)度并未大于流動相，但由于加入了某些稀釋劑，使得峰形變形情況依舊出現(xiàn)。因此廣義上對溶劑效應(yīng)的概念應(yīng)擴(kuò)展為由于樣品中某些組分在稀釋劑與流動相中的存在狀態(tài)有較大差異，導(dǎo)致色譜行為表現(xiàn)異常的情況。

二、溶劑效應(yīng)的原因

1、溶劑強(qiáng)度

這是普遍意義上的溶劑效應(yīng)成因，如當(dāng)流動相組成為低比例的乙腈水溶液，而樣品溶劑為純乙腈時，會由于溶劑的強(qiáng)度大于流動相而產(chǎn)生峰分叉或峰拖尾。

2、進(jìn)樣體積

當(dāng)進(jìn)樣體積較小時，擴(kuò)散至流動相中的溶質(zhì)占大多數(shù)，且擴(kuò)散在很短時間內(nèi)完成，因此峰形與用流動相直接溶解樣品無大差異。隨著進(jìn)樣的體積增大，留在溶劑本身里的溶質(zhì)的量逐漸增大，當(dāng)進(jìn)樣體積增大到一定數(shù)量，留在溶劑里的溶質(zhì)的量變得不可忽略，在色譜圖上就表現(xiàn)為色譜峰的分叉、拖尾等。

3、溶劑兼容性

有時當(dāng)我們使用流動相或流動相中的有機(jī)相無法直接溶解樣品，這時很多人會選擇使用氯仿、甲苯等能溶的溶劑，甚至DMSO溶劑來溶解樣品。這樣進(jìn)樣的結(jié)果是溶劑與流動相不兼容，溶質(zhì)難以在流動相中擴(kuò)散。又如在做參比制劑的溶出曲線中，溶媒中經(jīng)常加入表面活性劑。而帶有表面活性劑的溶劑進(jìn)樣后，由于溶質(zhì)在含有表面活性劑的溶劑中的分配系數(shù)與在流動相中的分配系數(shù)存在較大差異，就會導(dǎo)致峰形的問題，甚至保留時間的漂移。

4、電離狀態(tài)

電離狀態(tài)的差異主要由溶劑和流動相各自的pH差異引起。在反相體系中，目標(biāo)化合物的存在狀態(tài)不同，保留行為會有明顯的差異，而存在狀態(tài)就取決于目標(biāo)化合物在不同pH體系內(nèi)的電離狀態(tài)。若樣品在溶劑和流動相中電離狀態(tài)差異較大，樣品溶液在接觸流動相的過程中，來不及緩沖至流動相中的電離狀態(tài)，是個時間如果較長，就容易表現(xiàn)為保留時間發(fā)生錯位或峰形變形。

三、溶劑效應(yīng)的解決辦法

1、溶劑強(qiáng)度原因解決辦法

即調(diào)整稀釋劑或流動相，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動相都是可以的。一般情況下，為避免溶劑強(qiáng)度差異導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑中有機(jī)相比例和流動相相當(dāng)，必要時可略高于流動相，但應(yīng)當(dāng)據(jù)其評估其溶劑效應(yīng)風(fēng)險。

2、進(jìn)樣體積原因解決辦法

常規(guī)情況下，為了保證峰形，我們的進(jìn)樣體積都控制在5-20μL，盡量不要超過25μL。如果不能做到減少至合適的進(jìn)樣體積，為了得到較好的峰形，應(yīng)盡量選擇與流動相比例相同或接近的溶劑。

3、溶劑兼容性

使得溶劑與流動相能較好地兼容，目前辦法有兩個：

（1）若流動相或流動相中的有機(jī)相無法直接溶解樣品，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲備液，然后用流動相稀釋至所需濃度。

（2）在流動相中加入同樣的助溶劑或表面活性劑，或提高有機(jī)相的比例。

4、電離狀態(tài)原因解決辦法

電離狀態(tài)的差異許多情況下會表現(xiàn)為保留時間的漂移或不穩(wěn)定。可以通過將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動相一致，或增大流動相的緩沖能力來改善。