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蔬菜農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)介紹及注意事項(xiàng)
點(diǎn)擊: 次 時(shí)間:2019-05-05 14:43
農(nóng)藥是具有兩面性有利有弊，它是當(dāng)前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)用于防治病、蟲(chóng)、雜草對(duì)農(nóng)作物危害不可缺少的有毒化學(xué)物質(zhì)，對(duì)促進(jìn)農(nóng)業(yè)增產(chǎn)有極其重要的作用。但是由于長(zhǎng)期大量地不合理使用農(nóng)藥，極易形成農(nóng)藥殘留。農(nóng)藥殘留指使用農(nóng)藥后殘留于生物體、農(nóng)副產(chǎn)品和環(huán)境中的微量農(nóng)藥及其有毒的代謝物的總量。鑒于目前我國(guó)出現(xiàn)的農(nóng)產(chǎn)品安全性問(wèn)題以農(nóng)藥殘留污染最為常見(jiàn)和嚴(yán)重，監(jiān)控農(nóng)藥的合理使用，杜絕農(nóng)藥殘留超標(biāo)產(chǎn)品上市銷售成為農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全工作的重中之重?？刂妻r(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一就是對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量及時(shí)、準(zhǔn)確的分析檢測(cè)，因此，在流通領(lǐng)域中加強(qiáng)對(duì)農(nóng)殘的快速檢測(cè)已成為十分必要的監(jiān)管措施。
一、農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法
農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法大致可分為三大類：生物測(cè)定法、化學(xué)分析法、兼生物及化學(xué)的免疫分析法和生化檢測(cè)法。
（一）、農(nóng)藥殘留的生物測(cè)定技術(shù)
利用指示生物的生理生化反應(yīng)來(lái)判斷農(nóng)藥殘留及其污染情況，該方法一般作為引起中毒農(nóng)產(chǎn)品現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
（二）、農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)
用于農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)方法有分光光度法、極譜法、原子吸收光譜法、薄層層析法、氣相色譜法、液相色譜法、同位素標(biāo)記法、核磁共振波譜法、色質(zhì)聯(lián)用法等，這些分析方法有的靈敏度不高，有的需要昂貴的儀器，還有的需要特殊的設(shè)備。
（三）、農(nóng)藥殘留的生化檢測(cè)
有機(jī)磷與氨基甲酸酯農(nóng)藥共為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿脂酶抑制物，因此可以利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶-乙酰膽用堿酯酶（AChE）受抑制的程度來(lái)檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、無(wú)需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適用于現(xiàn)場(chǎng)的定性和半定量測(cè)定，目前已開(kāi)發(fā)出了相應(yīng)的各種速測(cè)卡和速測(cè)儀。我國(guó)現(xiàn)階段的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)就是用了該方法，已上升為農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為NY/T448-2001,名稱為蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，但方法只能用于測(cè)定有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑，其靈敏度和所使用的酶、顯色反應(yīng)時(shí)間和溫度密切相關(guān)，經(jīng)酶法檢測(cè)出陽(yáng)性后，需用標(biāo)準(zhǔn)儀器檢驗(yàn)方法進(jìn)一步檢測(cè)，以鑒定殘留農(nóng)藥品種及準(zhǔn)確殘留量。
（四）、農(nóng)藥殘留的免疫分析法
有放射性免疫分析、酶免疫分析、多組份分析物免疫分析、免疫傳感器分析等，因?yàn)槊庖叻ǔ善吩噭┖幸蕾噺膰?guó)外進(jìn)口，沒(méi)有大范圍推廣使用。
二、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）介紹
由農(nóng)藥殘留生化檢測(cè)法開(kāi)發(fā)的速測(cè)卡法（酶抑制顯色紙片法）和速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法），前者在80年代在省級(jí)部門小范圍使用過(guò)，后被后者取代。目前我省廣泛使用農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有兩大類—色譜檢測(cè)法和速測(cè)儀法。色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)，主要分布在省級(jí)相關(guān)部門，部分地州也具有一定的檢測(cè)能力。速測(cè)儀法只能作農(nóng)殘定性分析，但它具有短時(shí)間能夠檢測(cè)大量樣本、檢測(cè)成本低，對(duì)于檢測(cè)人員技術(shù)水平要求低，易于在基層推廣等特點(diǎn)，是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用最為廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。廣泛用于蔬菜、水果生產(chǎn)基地和批發(fā)市場(chǎng)等，主要用來(lái)防止有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)的蔬菜和水果流入市場(chǎng)。
（一）、有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥的作用機(jī)理
有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲(chóng)神經(jīng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲(chóng)中毒致死。如果有有機(jī)磷農(nóng)藥存在，有機(jī)磷農(nóng)藥就與膽堿酯梅結(jié)合，膽堿酯酶就不能分解乙酰膽堿為乙酸和膽堿，造成乙酰膽堿在神經(jīng)肌接頭和體內(nèi)其它部位的過(guò)量積聚，引起一系列神經(jīng)中毒癥狀。
（二）、乙酰膽堿酯酶抑制法（酶法）的作用原理
從生物化學(xué)的角度看，有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥與乙酰膽堿是競(jìng)爭(zhēng)性作用于膽堿酯酶的，即膽堿酯酶可以與乙酰膽堿結(jié)合，催化乙酰膽堿生成乙酰和膽堿，另一方面，如果膽堿酯酶與有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)合，就阻斷了反應(yīng)的進(jìn)行。根據(jù)這個(gè)原理，就可以利用膽堿酯酶的催化反應(yīng)的抑制法，設(shè)計(jì)一種通過(guò)顏色變化的直觀的檢測(cè)方法，來(lái)快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥的殘留情況。因此，生物化學(xué)法（酶法）就是利用某種酶受影響的程度來(lái)反映農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量。
（三）、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）方法原理
乙酰膽堿酯酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無(wú)顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。在溶液中反應(yīng)后，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值隨時(shí)間的變化，計(jì)算出抑制率，以此判斷蔬菜中含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的情況。具體的檢測(cè)步驟為：
（四）、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）使用過(guò)程中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題
1、速測(cè)儀法的優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：在于簡(jiǎn)單方便，快捷、成本低廉。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需30分鐘左右，它可以作為傳統(tǒng)儀器分析方法的有益補(bǔ)充，針對(duì)市場(chǎng)、農(nóng)場(chǎng)蔬菜農(nóng)藥殘留量進(jìn)行快速篩選監(jiān)測(cè)，保證上市蔬菜食用的相對(duì)安全性。
缺點(diǎn)：酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%~70%左右；存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，不能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥；不適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品；需要對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行專門培訓(xùn)，否則將會(huì)對(duì)出現(xiàn)的問(wèn)題無(wú)法正確處理或判斷，得出錯(cuò)誤的結(jié)果。
2、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）使用過(guò)程中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題
2.1檢測(cè)室溫度在20-30℃之間時(shí)，使用改進(jìn)后的酶，此時(shí)不用放在37~38℃保溫箱中培養(yǎng)，可以直接在室溫下培養(yǎng)，22℃左右培養(yǎng)20分鐘，25℃以上培養(yǎng)15分鐘，一旦室溫低于20℃，必須進(jìn)37~38℃保溫箱培養(yǎng)。
2.2上表②步驟中，加入提取試劑混合后不用倒出上層清液，直接在原器皿中靜置3-5分鐘。
2.3上表③步驟中，用圓底小試管代替儀器配置的平底小試管，方便在樣本混合器上混合。
2.4上表④到⑤步驟中，于待測(cè)液中加入底物混合后，要快速轉(zhuǎn)移到比色杯中進(jìn)行比色，否則容易影響檢測(cè)結(jié)果。
2.5速測(cè)儀法是使用分光光度計(jì)測(cè)定待測(cè)液吸光值隨時(shí)間的變化而計(jì)算檢測(cè)結(jié)果的，因此保持比色杯的清潔也是一個(gè)減少檢測(cè)誤差的環(huán)節(jié)。經(jīng)摸索，我們發(fā)現(xiàn)用熱水浸泡和用洗衣粉清洗比色杯比較容易洗干凈。
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一、農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法
農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法大致可分為三大類：生物測(cè)定法、化學(xué)分析法、兼生物及化學(xué)的免疫分析法和生化檢測(cè)法。
（一）、農(nóng)藥殘留的生物測(cè)定技術(shù)
利用指示生物的生理生化反應(yīng)來(lái)判斷農(nóng)藥殘留及其污染情況，該方法一般作為引起中毒農(nóng)產(chǎn)品現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。
（二）、農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)
用于農(nóng)藥殘留的化學(xué)檢測(cè)方法有分光光度法、極譜法、原子吸收光譜法、薄層層析法、氣相色譜法、液相色譜法、同位素標(biāo)記法、核磁共振波譜法、色質(zhì)聯(lián)用法等，這些分析方法有的靈敏度不高，有的需要昂貴的儀器，還有的需要特殊的設(shè)備。
（三）、農(nóng)藥殘留的生化檢測(cè)
有機(jī)磷與氨基甲酸酯農(nóng)藥共為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿脂酶抑制物，因此可以利用農(nóng)藥靶標(biāo)酶-乙酰膽用堿酯酶（AChE）受抑制的程度來(lái)檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥。該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)單、無(wú)需儀器或儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適用于現(xiàn)場(chǎng)的定性和半定量測(cè)定，目前已開(kāi)發(fā)出了相應(yīng)的各種速測(cè)卡和速測(cè)儀。我國(guó)現(xiàn)階段的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)就是用了該方法，已上升為農(nóng)業(yè)部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為NY/T448-2001,名稱為蔬菜上有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)方法，但方法只能用于測(cè)定有機(jī)磷和氨基甲酸酯類殺蟲(chóng)劑，其靈敏度和所使用的酶、顯色反應(yīng)時(shí)間和溫度密切相關(guān)，經(jīng)酶法檢測(cè)出陽(yáng)性后，需用標(biāo)準(zhǔn)儀器檢驗(yàn)方法進(jìn)一步檢測(cè)，以鑒定殘留農(nóng)藥品種及準(zhǔn)確殘留量。
（四）、農(nóng)藥殘留的免疫分析法
有放射性免疫分析、酶免疫分析、多組份分析物免疫分析、免疫傳感器分析等，因?yàn)槊庖叻ǔ善吩噭┖幸蕾噺膰?guó)外進(jìn)口，沒(méi)有大范圍推廣使用。
二、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）介紹
由農(nóng)藥殘留生化檢測(cè)法開(kāi)發(fā)的速測(cè)卡法（酶抑制顯色紙片法）和速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法），前者在80年代在省級(jí)部門小范圍使用過(guò)，后被后者取代。目前我省廣泛使用農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要有兩大類—色譜檢測(cè)法和速測(cè)儀法。色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)，主要分布在省級(jí)相關(guān)部門，部分地州也具有一定的檢測(cè)能力。速測(cè)儀法只能作農(nóng)殘定性分析，但它具有短時(shí)間能夠檢測(cè)大量樣本、檢測(cè)成本低，對(duì)于檢測(cè)人員技術(shù)水平要求低，易于在基層推廣等特點(diǎn)，是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用最為廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。廣泛用于蔬菜、水果生產(chǎn)基地和批發(fā)市場(chǎng)等，主要用來(lái)防止有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留嚴(yán)重超標(biāo)的蔬菜和水果流入市場(chǎng)。
（一）、有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥的作用機(jī)理
有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲(chóng)神經(jīng)中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性，造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo)，使昆蟲(chóng)中毒致死。如果有有機(jī)磷農(nóng)藥存在，有機(jī)磷農(nóng)藥就與膽堿酯梅結(jié)合，膽堿酯酶就不能分解乙酰膽堿為乙酸和膽堿，造成乙酰膽堿在神經(jīng)肌接頭和體內(nèi)其它部位的過(guò)量積聚，引起一系列神經(jīng)中毒癥狀。
（二）、乙酰膽堿酯酶抑制法（酶法）的作用原理
從生物化學(xué)的角度看，有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥與乙酰膽堿是競(jìng)爭(zhēng)性作用于膽堿酯酶的，即膽堿酯酶可以與乙酰膽堿結(jié)合，催化乙酰膽堿生成乙酰和膽堿，另一方面，如果膽堿酯酶與有機(jī)磷農(nóng)藥結(jié)合，就阻斷了反應(yīng)的進(jìn)行。根據(jù)這個(gè)原理，就可以利用膽堿酯酶的催化反應(yīng)的抑制法，設(shè)計(jì)一種通過(guò)顏色變化的直觀的檢測(cè)方法，來(lái)快速檢測(cè)有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸酯農(nóng)藥的殘留情況。因此，生物化學(xué)法（酶法）就是利用某種酶受影響的程度來(lái)反映農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留量。
（三）、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）方法原理
乙酰膽堿酯酶水解后，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥可以抑制乙酰膽堿酯酶的活性，使這種酶不能被水解，從而無(wú)顯色反應(yīng)。在溶液中加入乙酰膽堿酯酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在。在溶液中反應(yīng)后，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光值隨時(shí)間的變化，計(jì)算出抑制率，以此判斷蔬菜中含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的情況。具體的檢測(cè)步驟為：
（四）、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）使用過(guò)程中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題
1、速測(cè)儀法的優(yōu)缺點(diǎn)：
優(yōu)點(diǎn)：在于簡(jiǎn)單方便，快捷、成本低廉。整個(gè)檢測(cè)過(guò)程只需30分鐘左右，它可以作為傳統(tǒng)儀器分析方法的有益補(bǔ)充，針對(duì)市場(chǎng)、農(nóng)場(chǎng)蔬菜農(nóng)藥殘留量進(jìn)行快速篩選監(jiān)測(cè)，保證上市蔬菜食用的相對(duì)安全性。
缺點(diǎn)：酶試劑易失活，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定，檢測(cè)結(jié)果誤差較大，重復(fù)性不好，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%~70%左右；存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥，不能檢測(cè)有機(jī)氯類、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥；不適合檢測(cè)蔥蒜類、香菜、韭菜、番茄、胡蘿卜、茭白、蘑菇、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品；需要對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行專門培訓(xùn)，否則將會(huì)對(duì)出現(xiàn)的問(wèn)題無(wú)法正確處理或判斷，得出錯(cuò)誤的結(jié)果。
2、速測(cè)儀法（酶抑制分光光度法）使用過(guò)程中應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題
2.1檢測(cè)室溫度在20-30℃之間時(shí)，使用改進(jìn)后的酶，此時(shí)不用放在37~38℃保溫箱中培養(yǎng)，可以直接在室溫下培養(yǎng)，22℃左右培養(yǎng)20分鐘，25℃以上培養(yǎng)15分鐘，一旦室溫低于20℃，必須進(jìn)37~38℃保溫箱培養(yǎng)。
2.2上表②步驟中，加入提取試劑混合后不用倒出上層清液，直接在原器皿中靜置3-5分鐘。
2.3上表③步驟中，用圓底小試管代替儀器配置的平底小試管，方便在樣本混合器上混合。
2.4上表④到⑤步驟中，于待測(cè)液中加入底物混合后，要快速轉(zhuǎn)移到比色杯中進(jìn)行比色，否則容易影響檢測(cè)結(jié)果。
2.5速測(cè)儀法是使用分光光度計(jì)測(cè)定待測(cè)液吸光值隨時(shí)間的變化而計(jì)算檢測(cè)結(jié)果的，因此保持比色杯的清潔也是一個(gè)減少檢測(cè)誤差的環(huán)節(jié)。經(jīng)摸索，我們發(fā)現(xiàn)用熱水浸泡和用洗衣粉清洗比色杯比較容易洗干凈。
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